BMDM，即骨髓来源巨噬细胞（Bone Marrow-Derived Macrophage），是一种从小鼠骨髓中分离并体外诱导分化的原代巨噬细胞。通常用于药物筛选或研究特定基因在巨噬细胞功能中的作用。然而在BMDM中进行转染并非易事。
由于BMDM是原代免疫细胞，增殖能力弱、极易被激活引发炎症，且胞内核酸酶丰富，会快速降解外源基因，往往导致常规方法转染效率极低。
Arcegen推出由新型多聚体高分子材料开发的升级版核酸转染试剂：Celthy SureXcel 3000（CAT#C130010），转染效率极高且细胞毒性极低，能够满足各种转染需求，包括BMDM等各类难转染细胞。
我们今天就来看下如何进行这个实验。
所需试剂
实验步骤
1.DNA转染
注：转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响，建议初次使用时设置梯度进行优化最佳使用量。
1） 细胞铺板，至转染操作时，以细胞融合度达70%-90%为佳。
2） 按照下表使用Opti-MEM培养基稀释转染试剂溶液，轻轻混匀。
3） 使用Opti-MEM培养基稀释DNA，得到DNA预混液，然后添加Enhancer转染增强剂溶液，轻轻混匀，得到稀释的DNA。
4） 将稀释的DNA加入已稀释的转染试剂溶液中(1:1比例)。
5） 室温孵育10-15分钟。
6） 将DNA-转染试剂复合物逐滴加到细胞中，轻轻混匀。
2.siRNA转染
转染siRNA操作与DNA的转染操作流程一样，但在稀释siRNA时则不需要加入Enhancer转染增强剂。
3.mRNA转染
转染mRNA操作及用量与DNA的转染操作流程一样，但在稀释mRNA时则不需要加入Enhancer转染增强剂。
不同细胞培养容器转染用量（仅供参考）：
【注】该表使用量仅供参考，DNA与转染试剂溶液具体使用量还需根据细胞类型及其他实验条件进行优化。
建议使用时比值保持在1:0.5-1:5之间。其中mRNA的用量及实验条件和DNA一致；若细胞比较脆弱，导致细胞死亡较多，可以通过将增强剂减半来获得更好的结果。
结果测试
使用绿色荧光蛋白（GFP）作为测试蛋白，通过荧光显微镜及流式细胞仪进行转染效果检测。我们使用C130010对BMDM细胞进行转染，得到了非常好的结果，明显优于竞品。
图 利用本试剂盒和竞品T*3000分别对BMDM进行DNA转染结果图
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| 产品应用 | 产品名称 | 产品货号 |
| DNA、SiRNA、miRNA、MRNA及ASO等全部核酸类型转染 | Celthy SureXcel3000 Transfection Reagent Celthy SureXcel3000 转染试剂 |
C130010 |
| 应用于减血清哺乳动物细胞培养和转染时复合物的配置 | Optimal-MEM Reduced SerumMedium减血清培养基(转染专用，含酚红) | C231117 |
| 应用于多种哺乳动物细胞培养，尤其是生长快、粘附性低的细胞、杂交瘤的骨髓瘤细胞、克隆细胞、DNA 转染的转化细胞等 | DMEM 高糖培养基(含L-谷氨酰胺,丙酮酸钠110mg/L;不含 HEPES,双抗) | C231115 |
| 产品应用 | 产品名称 | 产品货号 |
| 转染DNA(小于10 kb)、RNA和寡核苷酸，可替代 Lipo2000 | Celthy Univer Liposomal Transfection Reagent Celthy Univer 脂质体转染试剂 |
C130002 |
| DNA(小于 10 kb)、RNA和寡核苷酸，脂质体转染，纳米级 | Celthy Univer NanoLiposomal Transfection Reagent Celthy Univer纳米脂质体转染试剂 |
C130008 |
| 293 系列尤其适用，液体形式免配置，可用于病毒载体生产(AAV/LV) | C130006 | |
| 粉剂，高性价比，可用于病毒载体、蛋白生产 | C130009 | |
| 用于 mRNA，siRNA转染，可达 95%基因编辑效率 | C130007 | |
| 用于siRNA、miRNApre-miRNA、 mimic miRNA、antimiRNA 等RNA 转染，极高基因沉默效率 | C130004 | |
| 悬浮 293 细胞体系大规模生产重组 AAV 专用 | C130005 |